表1 喘息、ACO、COPD患者（replication cohort）の患者背景性別, 男性年齢 (歳)Pack-years1秒率予測1秒量好酸球 (/μL)好中球 (/μL)数値は中央値（四分位範囲）または人数（割合）を示す。喘息（n = 30）8（27）43（40-50）0（0-5）76.3（73.0-84.4）92.8（82.7-99.7）347（236–499）3704（2920–5026）結 果COPD（n = 30）27（90）74（70-78）46（25-71）52.7（42.0-59.5）64.2（42.8-82.4）161（92–205）4170（3270–5026）ベンラリズマブ投与患者においては、ベンラリズマブの投与タイミングに合わせて、投与直前、8週、16週、24週において採血を行い、末梢血より磁気ビーズ法にてTリンパ球を採取した。なお、本研究内容は静岡県立総合病院倫理委員会の承認を得て実施し、対象患者より書面にて同意を取得した。遺伝子発現定量 PBMCまたはTリンパ球よりtotal RNAを抽出し、cDNA合成後に定量的RT-PCR法にて、GLCCI1、Nrf2、HDAC2遺伝子発現量を定量した。定量にはPowerUp SYBR Green Master Mix（Thermo Fisher Scientific）を用い、内在性コントロールにはβ-actin遺伝子発現量を用い、ΔCt法にて相対的発現量を算出した。統計解析 各データは中央値（四分位範囲）または人数（割合）で示した。miRNAおよび遺伝子発現量は、対数（log2）で示し各発現量の平均値が0となるように標準化を行った。群間比較は、連続変数ではKruskal-WallisまたはMann–Whitney U testを用い、カテゴリー変数ではFisher’s exact testを用いた。また、対応のある検定にはWilcoxon signed-rank testを用いた。ACO患者の診断バイオマーカーの構築におけるバイオマーカーの有用性評価には、診断名（ACO、喘息またはCOPD）を目的変数とした多項ロジスティック回帰分析を用い、この回帰モデルよりreceiver operating characteristic（ROC）曲線を描き、曲線下面積（AUROC）を算出した。COPD患者における治療層別化バイオマーカーの構築ACO（n = 30）28（93）71（66-78）29（16-40）57.5（46.0-65.1）61.6（48.2-77.3）415（318–582）3545（3091–4070）また、回帰モデル作成の際のバイオマーカーの評価には、ランダムフォレストを用い変数重要度を算出した。P<0.05を有意差ありと判断した。臨床研究１：ACO患者の診断バイオマーカーの構築ACO診断バイオマーカーとしてのmiRNAの同定 PCRアレイを用い、discovery cohortにてmiRNAの定量を行った結果、84の測定対象の内、52のmiRNAが検出された。ACO患者と喘息患者において2倍以上の発現変動が認められたmiRNAは9つ（miR-148a-3p、miR-15b-5p、miR-191-5p、miR-21-5p、miR-223-3p、miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-26a-5p、miR-26b-5p）であった。 Replication cohort（表１）において9つのmiRNAの定量を行い、多項ロジスティクス回帰分析の結果、5つのmiRNA（miR-148a-3p、miR-15b-5p、miR-223-3p、miR-23a-3p、miR-26b-5p）がACO患者において特徴的な発現パターンを示し（図1）、有意にACO患者を鑑別可能であることが示唆された（表2）。パスウェイ解析 ACO患者において特徴的な発現パターンを示した5つのmiRNA（miR-148a-3p、miR-15b-5p、miR-223-3p、miR-23a-3p、miR-26b-5p）が制御する遺伝子より、ACO患者に特徴的なKyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）パスウェイを推定した。135135
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