表2 In vitro 実験条件下におけるDPZ濃度測定の検量線Correlation coefficient (r)Calibration curveAnalyteDPZy = 0.1054x + 0.0503非認知症高齢者（n=20）Intra-day CV (%)n=51.75.48.10.97.54.65.8Inter-day CV (%)n=56.04.78.05.26.55.35.4の重水素体であるd7-DPZを最終濃度100 ng/mLとなるように添加した。十分に撹拌後、保持液抽出を行い、減圧乾固した試料を移動相で再溶解し、試料に供した。CYP2D6の遺伝子型判定 DNAはWizard® Genomic DNA Purification Kit（Promega）を用いて血液試料より抽出した。CYP2D6の遺伝子多型はポリメラーゼ連鎖反応−制限酵素断片長多型（PCR-RFLP）法により判定を行った。CYP2D6はCYP2D6*4、*5、*10変異を有さない場合にCYP2D6*1の野生型とした。血漿中α-Syn量の測定 血漿試料からのエクソソーム抽出は、Théryらの方法12）を参考に下記の通り行った。血漿900 µLを遠心分離（6000 rpm、30 min、4 ℃）した後、上清をマイクロチューブに分取し、遠心分離（17000 rpm、45 min、4 ℃）した。その上清をマイクロチューブに分取し、更に遠心分離（50000 rpm、120 min、4 ℃）した。その後、その上清を別のマイクロチューブに分取（上清試料）し、残渣に1 mLのダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（DPBS）を加え懸濁後、遠心分離（50000 rpm、70 min、4℃）した。その後、上清を廃棄し、再度残渣を1 mLのDPBSで懸濁し、遠心分離（50000 rpm、70 min、4 ℃）した。上清（エクソソーム抽出残渣液）および50 µLのDPBSで残渣を再懸濁した溶液（エクソソーム抽出液）を試料として回収した。本研究においては、非認知症高齢者0.999レビー小体型認知症の遺伝学的・生化学的背景の解明表1 対象者の背景認知症高齢者（n=34）82歳（±6.2歳）年齢70歳（±6.9歳）性別男性：8 女性：26男性：7 女性：13鑑別DLB：14 AD：20DLB; Dementia with Lewy Bodies, AD; Alzheimer Disease.データは平均値（標準偏差）で示している。Concentration (ng/mL)Recovery (%)n=5919698109101991000.51.05.010.025.050.0100.03名、DLB患者3名、AD患者2名の血漿試料を用いて検討を行った。血漿試料からのエクソソーム抽出の確認は、ウエスタンブロット法を用いて行った。タンパク質量が10 µgとなるように各試料を12％ポリアクリルアミドゲルにアプライし、電気泳動後、PVDF膜（Bio-Rad Laboratories, Inc.）に転写した。転写後のPVDF膜をECL Prime Blocking Agent（GE Healthcare）でブロッキングし、エクソソームマーカーであるCD81に対するマウス由来抗体（コスモ・バイオ）を1次抗体、ヒツジ由来抗マウス抗体（GE Healthcare）を2次抗体として使用した。タンパク質の検出にはECL Prime Western Blotting Detection Reagent （GE Healthcare）を用いた。また、エクソソーム抽出残渣液中およびエクソソーム抽出液中のα-Syn濃度の測定は、AnaSpecより購入したELISAキット（SensoLyto® Anti-alpha-Synuclein Quantitative ELISA Kit）を用いてKit内のプロトコールに従って行った。統計解析 患者背景については、平均値（標準偏差）で示して−111111
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