tnuoCtnuoCof DLL3Transient overexpression lysate6ABC00Lysate ControlmarkerRovalpituzumabRova-IR700markerRovalpituzumabRova-IR700marker2 µgprotein stainingSBC32 µgIR700 ■uorescenceDLL3発現細胞株におけるRova-IR700を用いたin vitro NIR-PIT SBC5-DLL3-luc-GFPおよび3T3-DLL3-luc-GFPの蛍光顕微鏡観察をNIR-PITの前後に行った。近赤外光（4 J/cm2）への曝露後、細胞の膨張と破裂、および死細胞染色が観察された。これらの変化は、露光後30分以内に観察され、NIR-PIT後のnecroticな細胞死の誘導を示唆している（図3A）。DLL3を発現していない非標的細胞の3T3-RFPに変化は観察されなかった（図3B）。図2 IR700と抗DLL3抗体の結合（A）SDS-PAGEによるRova-IR700の検出。（左：Colloidal blue染色、右：700nmの蛍光波長）（B）DLL3発現細胞株の細胞ライセートに対するRova-IR700の結合。（C）SBC3およびHBEC3細胞におけるRova-IR700の発現解析。 次に、in vitro NIR-PITの効果を定量化するために、フローサイトメトリーを用いてルシフェラーゼ活性を評価した。PIで評価した細胞死率は光のJ数に依存的に増加した。近赤外線光照射単独またはRova-IR700単独では有意な細胞傷害性は観察されなかった（図3C）。ルシフェラーゼ活性は、NIR-PIT群において発光量の有意な減少を示した（図3D）。以上からDLL3を標的としたNIR-PITがin vitroで光量依存的に細胞死を誘導することが確認された。(Da)250K150K100K50K25K15K10K10080604020101100102IR700 ■uorescencecontrolRova-IR700Rova-IR700+ Rovalpituzumab blocking103HBEC3(A.U.)39900200000.4385040302010101100102IR700 ■uorescence(Da)(A.U.)908250K150K100K50K70025K10K513controlRova-IR700+ CD16 blocking103Western Blot
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