-/-1CPN)lortC l-*AB noc fodoP1Cf(SDPLSBFSDPLSBFDBNSBF%01SDPL %01TW***2.01.51.00.50WTNPC1-/-CerKは主にエンドソームに局在することが知られている。本研究においてもCerK-mCherryはエンドソームに局在していることが観察され、この局在はNPC1-/-細胞と正常対照細胞の間で顕著な違いは認められなかった（図2A）。一方、BODIPY-Cerを細胞に添加すると、ゴルジ体に集積することが知られている。本研究ではBODIPY-Cerを細胞に添加して2.5時間インキュベートした時の細胞内局在を観察したところ、その局在は、WT細胞においてはゴルジ体であったが、NPC1-/-細胞においてはエンドソームに異常な局在が観察された（図2A）。図2 NPCにけるCerKとセラミドの細胞内局在A：CHO細胞（WT, NPC1-/-）におけるBODIPY-CerおよびCerK-mCherryの細胞内局在（scale bar, 5μm）。B：CHO細胞（WT, NPC1-/-）を10% FBSまたは10% LPDSを含む培地で48時間培養した時のフィリピン染色像およびBODIPY-Cerの細胞内局在（scale bar, 5μm）。C：10% FBSまたは10% LPDSを含む培地で48時間培養したCHO細胞（WT, NPC1-/-）に10μM BODIPY-Cerを添加して産生されたBODIPY-C1Pの量（n=3 per group）（one-way ANOVA）。mean±SEM。*p<0.05、*** p<0.001。興味深いことに、NPC1-/-細胞においてはBODIPY-CerとCerK-mCherryがエンドソームにおいて共局在していた。一方、WT細胞においては、両者の局在が異なっていた（図2A）。従って、NPC1-/-細胞においてはセラミドとCerKが共局在することでC1Pの産生が亢進する可能性が示唆された。次に、NPC1-/-細胞における異常なBODIPY-Cerの局在は、遊離型コレステロールの蓄積に起因する可能性を検証した。リポ蛋白質を含まない血清（lipoprotein-deficient serum; LPDS）でNPC1-/-細胞を48時間培養したところ、遊離型コレステロールの蓄積を軽減90BODIPY-CerBODIPY-CerFilipinWTCerK-mCherryMergeCerK-mCherryMergeNPC1-/-BODIPY-CerWTNPC1-/-
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