(μ)netorp gm/gsevetseohCNVP-231ー＋ー＋NPC1-/-npevitaeRnpl loreytisnetnilif iliAiFDiFFC**lil*ili0tiliFJBili**Glii lIlilinpevitaeRnpytisnetnilif iliytisneni ilif iliortnoCsKreCsnpevitae0RsiRNAnpevitaeRecheVecheVANRmKreC0siRNA132-PVNP1C**2.01.51.00.50NVP-231ー＋ー＋NPC1-/-EWT**1.51.00.5NVP-231ー＋ー＋NPC1*HNormalNPC1*Filipin**806040200WT****1.51.00.5ContCerKContCerKNormalNPC1*NPC1-/-mChe-Rab9S21NNPC1-/-VehicleNVP-231NPC1*VehicleNVP-231NormalCerK0.5CerKNPC1-/-FilipinGFP-Rab9Q66L図3 NPCにおける細胞内コレステロール蓄積とC1Pの関連性A-C：CHO細胞（WT, NPC1-/-）にvehicle（0.1% DMSO）または100 nM NVP-231を48時間処理した時のフィリピン染色像（scale bar, 5μm）（A）、フィリピンの平均蛍光強度の比（n=4 per group）（B）、Amplex red assayによる遊離型コレステロールの定量値（n=5 per group）（C）。D、E：ヒト皮膚線維芽細胞（Normal, NPC1*）にvehicle（0.1% DMSO）または100 nM NVP-231を48時間処理した時のフィリピン染色像（scale bar, 20μm）（D）、フィリピンの平均蛍光強度の比（n=6 per group）（E）。F-H：ヒト皮膚線維芽細胞（Normal, NPC1*）にcontrol siRNAまたはCerKに対するsiRNAを処理して48時間培養した。CerKのノックダウン効率をNBD-C1Pの産生量およびCerKのmRNAを定量することで確認した（F）。これら細胞のフィリピン染色像（scale bar, 20μm）（G）とフィリピンの平均蛍光強度の比（n=4 per group）（H）。I：GFP-Rab9またはGFP-Rab9Q66Lを一過性発現させたNPC1-/-細胞にvehicleまたは2μM C1Pを24時間処理した時のフィリピン染色像とGFP-Rab9、GFP-Rab9Q66Lの細胞内局在（scale bar, 5μm）。J：GFP-Rab9S21Nを一過性発現させたNPC1-/-細胞にvehicleまたは100 nM NVP-231を48時間処理した時のフィリピン染色像とGFP-Rab9S21Nの細胞内局在（scale bar, 5μm）。B、C、E、H：one-way ANOVA。F：Student’s t-test。mean±SEM。*p<0.05、** p<0.01。92WTVehicleNVP-231NormalVehicleNVP-231NormalNPC1*siRNAContRatio1.0CerK0.6Cont1.4NBD-C1Pβ-tubulin1.00.5CerKContNormalContNPC1*FilipinGFP-Rab9
元のページ ../index.html#106