4oboR))((結 果Robo4過剰発現がマウスの敗血症病態に与える影響の解析 Robo4発現の促進が敗血症病態に与える影響を確認するため、タモキシフェン投与により血管内皮細胞特異的にRobo4過剰発現を誘導できるマウスを作製した。まず、CAGプロモーター下流に、loxP配列に挟まれたstopコドンとマウスRobo4 cDNA配列を持つマウスを作製した。次に得られたマウスを、血管内皮細胞特異的にCre/ERT2を発現する（CDH5-Cre/ERT2）マウス9）と掛け合わせ、目的のマウス（Robo4iECマウス）を取得した（図1A）。得られたRobo4iECマウスにタモキシフェンを投与したところ、全身の臓器でRobo4 mRNAの発現増加が確認され、マウスが良好に樹立できたことが確認できた（図1B）。 次に、Robo4の過剰発現が敗血症病態に与える影響を解析するため、タモキシフェンを投与した図1 Robo4過剰発現マウスの作製とLPS投与モデルを用いた解析（A）Robo4iECマウスのトランスジーンとジェノタイピング結果 （B）タモキシフェンを投与したRobo4iECマウスの各臓器におけるRobo4 mRNAの発現量（n=5, mean±SEM、*p<0.05、**p<0.01 by Student＇s t-test） （C）タモキシフェンを投与したRobo4iECマウスとコントロールマウス（CDH5-Cre/ERT2マウス）にLPSを投与した時の生存時間の解析（Control: n=18、Robo4iEC: n=17、p=0.017 by log-rank test）Robo4iECマウスとコントロールマウス（CDH5-Cre/ERT2マウス）にLPSを腹腔投与し生存率を解析した（図1C）。その結果、コントロールマウスは12% （2/17）、Robo4iECマウスは56％ （10/18）が生存していた。この結果から、血管内皮細胞へのRobo4発現の促進が敗血症病態を緩和することが示された。Robo4発現を制御する新規メカニズムの探索 Robo4過剰発現マウスの検討から、Robo4発現促進分子が敗血症治療薬となる可能性が示された。そこで、Robo4発現促進分子の開発に向け、まずRobo4発現を制御するシグナル伝達系を同定するために、今回はtransforming growth factor-β （TGF-β）-SMADシグナルに着目し解析を行った。TGF-βファミリーに属するbone morphogenetic protein 9（BMP9）をヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）に処理すると、Robo4の発現が強く抑制された。また、このRobo4発現の抑制は、BMP9血管透過性を標的とする新しい抗炎症薬の開発(bp)800700500400p=0.017p=0.017p=0.017＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊7171CDH5 promoterloxPCAG promoterCre/ERT2loxPstopmRobo4ControlTamoxifen%%CDH5-Cre/ERT2 (720 bp)stopflox-Robo4 (413 bp)(h)BC＊A
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