A C l ＊＊)eprup(egrem1KPRS)der()neerg(03PVS92A6203PVS9203PVS92A6203PVS9203PVPN図6 SRPK1によるVP30リン酸化分子機構（A）リン酸化検出アッセイ。キナーゼ認識配列RxxSモチーフに変異を導入すると、VP30のリン酸化が抑制された（赤枠）。（B）免疫沈降法によるSRPK1－VP30間相互作用の解析。RxxSモチーフ変異体はSRPK1との相互作用が減弱していた（変異体ではSRPK1は免疫沈降されなかった）。（C）免疫蛍光染色。RxxSモチーフ変異体はSRPK1との共局在を認めなかった（赤枠）。NP、SRPK1、VP30が共局在すると黄白色を示す。図7 キナーゼ認識配列に変異を導⼊した組換えウイルスの増殖RxxSモチーフに変異を導入した全長組換えウイルス（△）を構築したところ、明らかな増殖阻害を認めた。ウイルスの複製におけるリン酸化の重要性が示唆された。グラフはMean±SDを示す(n≧3)。得られた結果はANOVA検定及びTukey検定により解析した。アスタリスクはrecEBOV_26A29Sと他の2株との違いを示した。＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊82DMSO SRPK1 merge VP30 pSer29 BSRPK1 VP30Flag -tubulin SRPK1 VP30Flag Input VP30Flag -IP VP30 VP30wt VP3029S VP3026A29S
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