Ａ図2 免疫組織染色による抗小脳抗体の同定抗体陰性例（A）、neuropil pattern（B）、intracellular pattern（C）を示す。GL; granular cell layer（顆粒細胞層）、ML; molecular layer（分子層）、PL; Purkinje cell layer（プルキンエ細胞層）50μm50μm50μm結 果免疫組織染色 成体ラット小脳の凍結組織をクライオスタットで7μm厚の切片に切り出し、氷上で20分間アセトン固定を行った。固定した切片を再水和、ついで10％ヤギ血清を含むリン酸緩衝生理食塩水により室温で40分間ブロックした。その後、希釈した患者血清（1：100）と室温で1時間インキュベートした。リン酸緩衝生理食塩水で洗浄後、切片をAlexa-Fluor 488ヤギ抗ヒトIgG（1：1000、Molecular Probes、Eugene、OR）及びHoechst 33,342（1：1000、Nuclear Probes、CellStain）と室温で1時間インキュベートした。蛍光画像は共焦点レーザー走査型顕微鏡システム（LSM710; Carl Zeiss AG、Oberkochen、Germany）で撮像した。 上記の方法で、対象及び対照者の血清を用いて免疫組織染色を行い、血清中に含まれる抗小脳抗体を検出した。免疫組織染色における陽性率を各群で比較した。ついで、免疫組織染色の結果から認識抗原の分布を元にして、抗小脳抗体陽性ISAをneuropil pattern、intracellular pattern、陰性群に分類し、臨床的特徴を検討した（図2）。統計処理 連続変数についてはKruskal-Wallis検定または一元配置分散分析、カテゴリー変数についてはカイ二乗検定またはFisherの正確検定を用いて算出した。p値が0.05未満である場合に有意と判断した。 310例のうち、臨床情報の不明な症例 26例を除外した。その後、SPORTAX基準を用いて、発症年齢や家族歴から36例、MSA-CやHA 50例、臨床・画像・検査所見から他の診断が妥当な症例131例を除外した。最終的に、67例がISAとして抽出された。これらの67例は、既知の抗神経抗体（mGluR1、IgLON5、GAD、VGCC、neurochondrin、GluD2、Caspr2）、及び傍腫瘍性神経症候群関連抗体を測定し、陰性であることを確認した（図1）。 各群の女性は、ISA 27例 （40.3％）、MSA-C 18例（60.0％）、HA 12例（60.0％）、健常者 13例 （72.2％）であった。発症時の年齢の中央値は、ISA 60歳、MSA-C 58歳、HA 55歳であった（表1）。ISAにおける抗小脳抗体陽性率は他の群よりも高率であった ISA、MSA-C、HA、健常者における免疫組織染色での抗小脳抗体陽性率は、30/67 （44.8％）、3/30155155ＢＣ
元のページ ../index.html#171